Determinación cuantitativa de enterococos en aguas utilizando un método cromogénico alternativo / Quantitative determination of enterococci in water using an alternative chromogenic method

INTRODUCCIÓN: el control de la calidad de las aguas es vital para la protección de la salud humana y la biodiversidad en el ambiente acuático. Varios microorganismos son utilizados como indicadores de contaminación fecal para este propósito, dentro de ellos los enterococos son considerados buenos indicadores, porque sobreviven más tiempo ante condiciones adversas en la naturaleza. OBJETIVOS: evaluar la capacidad de un nuevo método cromogénico alternativo para la detección y enumeración de enterococos en aguas por la técnica de filtración por membrana, en comparación con el método estándar ISO 7899:2. MÉTODOS: se recolectaron muestras de aguas de tres orígenes diferentes para determinar su calidad. Las muestras se ensayaron en paralelo por las dos metodologías (alternativa y referencia), empleando la técnica de filtración por membrana. Para evaluar el desempeño de los métodos se determinaron varios parámetros: sensibilidad, especificidad, exactitud, porcentaje de falsos positivos, porcentaje de falsos negativos, índice kappa. Los tres primeros parámetros se calcularon para ambos métodos antes y después de la confirmación por pruebas bioquímicas. Los resultados se analizaron desde el punto de vista estadístico, teniendo en cuenta los principales criterios definidos en las normas ISO 16140 e ISO 177994. RESULTADOS: con el método alternativo los resultados se obtuvieron a las 24 h, estos mostraron valores de sensibilidad (99 %) y exactitud (98 %) más elevados que con el de referencia (97 % y 97 %, respectivamente), el cual demoró más de 48 h. La eficiencia y exactitud de ambos métodos fue similar y se obtuvo una concordancia entre ellos casi perfecta (kappa = 0,96) con el total de las muestras de aguas ensayadas. CONCLUSIONES: los resultados alcanzados indican que el método alternativo es eficiente para el recuento de enterococos provenientes de diferentes tipos de muestras de agua. Resulta además un método simple, más rápido y económicamente factible.

INTRODUCTION: water quality control is essential for the protection of human health and biodiversity in the aquatic environment. For this purpose, several microorganisms are used as indicators of fecal contamination. Among them are enterococci, which are considered to be good indicators, since they survive for a longer time in adverse natural conditions. OBJECTIVES: evaluate the suitability of a new alternative chromogenic method for the detection and enumeration of enterococci in water by membrane filtration technique, in comparison with the ISO 7899:2 standard method. METHODS: water samples were collected from three different sources to determine their quality. The samples were assayed in parallel with the two methodologies (alternative and reference) using the membrane filtration technique. The following parameters were determined to evaluate the performance of the methods: sensitivity, specificity, accuracy, percentage of false positives, percentage of false negatives, kappa index. The first three parameters were estimated for both methods before and after confirmation by biochemical testing. Results were analyzed statistically based on the main criteria defined by ISO standards 16140 and 177994. RESULTS: with the alternative method, results were obtained at 24 h, whereas the reference method required more than 48 h. Sensitivity and accuracy were higher with the alternative method (99 % and 98 %, respectively) than with the reference method (97% and 97%, respectively). Both methods had similar efficiency and accuracy, with almost perfect concordance between them (kappa = 0.96) in all the water samples tested. CONCLUSIONS: results show that the alternative method is efficient for the enumeration of enterococci from different types of water samples. It is also a simple, faster and economically feasible method.

Evaluación de la peptona papaínica de corazón de res para el enriquecimiento selectivo de Enterococcus / Evaluation of beef heart papainic peptone for selective enrichment of Enterococcus

Introducción: el control microbiológico de aguas y alimentos ha motivado el desarrollo de medios de cultivo selectivos capaces de detectar Enterococcus, los cuales necesitan de una fuente de energía apropiada para garantizar la recuperación de estos. Objetivos: comparar diferentes bases nutritivas elaboradas a partir de productos y subproductos alimenticios según su capacidad de promoción de crecimiento del género Enterococcus y evaluar la exactitud del medio de cultivo caldo azida dextrosa. Métodos: para el ensayo se seleccionaron 80 cepas de diferentes géneros. Se prepararon dos variantes experimentales del caldo azida dextrosa (una tamponada) y se inocularon los microorganismos seleccionados a una concentración estandarizada. El incremento de la biomasa se determinó midiendo la densidad óptica en un espectrofotómetro a 640 nm cada una hora. La evaluación microbiológica del medio de cultivo se realizó utilizando diferentes géneros microbianos a distintas concentraciones. Se determinó la sensibilidad, especificidad, exactitud diagnóstica y relativa y el índice Kappa del diagnosticador. Como medio de referencia se utilizó el caldo azida glucosa proveniente de la firma comercial Merck (Alemania). ..

Introduction: microbiological control of water and food has motivated the development of selective culture media capable of detecting Enterococcus, which need an appropriate source of energy to ensure the recovery of microorganisms. Objectives: compare different nutrient bases produced from food products and by-products according to their growth promotion capacity for the genus Enterococcus, and evaluate the accuracy of dextrose azide broth culture medium. Methods: eighty strains of different genera were selected for the test. Two experimental variants of dextrose azide broth were prepared (one buffered) and the microorganisms selected were inoculated at a standardized concentration. Biomass increase was determined by measuring optical density in a spectrophotometer at 640 nm every 1 h. Microbiological evaluation of the culture medium was carried out using different microbial genera at different concentrations. Diagnostic and relative sensitivity, specificity and accuracy, and the Kappa index were determined for the culture medium. Glucose azide broth (Merck, Germany)ss production than the other genera...

Enterococcus, medios de cultivo convencionales y cromogénicos / Enterococcus, conventional and chromogenic culture media

El género Enterococcus ha sufrido variaciones en su clasificación y es considerado actualmente como un género independiente de Streptococcus. Por su elevada incidencia en las infecciones nosocomiales y su resistencia antimicrobiana, y por ser considerados indicadores de contaminación fecal, estos microorganismos han adquirido una importancia notable en la actualidad y se ha desarrollado una gran cantidad de medios de cultivo de diferentes propósitos, tanto convencionales como cromogénicos y/o fluorogénicos, específicos para este género, que son empleados en los laboratorios de Microbiología de todo el mundo para lograr su aislamiento e identificación de muestras clínicas, aguas y algunos alimentos. La selección del tipo de medio a utilizar depende de la experiencia, así como también del tipo de muestra, del método de cultivo y del grado de contaminación de la muestra con otros organismos, por lo que resulta de gran importancia realizar una revisión bibliográfica sobre esta temática. El objetivo de esta revisión bibliográfica sobre el tema consiste en realizar una recopilación de los principales medios de cultivo existentes para este género, su principio de funcionamiento, así como los principales ingredientes que contienen, y resaltar las ventajas que tiene el uso de los medios cromogénicos y/o fluorogénicos al ser mucho más sensibles, rápidos y exactos

The genus Enterococcus has been classified in different manners. At present, it is considered to be a separate type of Streptococcus. These microorganisms have gained considerable importance due to their high incidence in nosocomial infections, their antimicrobial resistance and their role as indicators of fecal contamination. A large number of culture media have been developed for different purposes related to this genus. These include conventional, as well as chromogenic and/or fluorogenic culture media, used in microbiology laboratories around the world for isolation and identification in clinical samples, water and some food products. Choice of a given medium is based on experience, sample type, culture method and degree of sample contamination with other organisms. Hence the importance of carrying out a bibliographic review of the subject. The purpose of this second bibliographic review was to collect information on the main culture media used for this genus, their operating principle and their main ingredients, highlighting the advantages of chromogenic and/or fluorogenic media, due to their greater speed, sensitivity and accuracy

Evaluación del medio cromogénico CromoCen® ENT para el diagnóstico clínico de Enterococcus / Assessment of the CromoCen ENT® chromogenic medium for clinical diagnosis of Enterococcus species

Introducción: la frecuente incidencia de Enterococcus en los hospitales y su creciente resistencia antimicrobiana a nivel mundial, ha incrementado la necesidad de su vigilancia y control intrahospitalario, por lo que resulta imprescindible contar con medios diagnósticos más sensibles y exactos. Objetivo: ampliar la evaluación de la funcionalidad del medio cromogénico CromoCen® ENT para el aislamiento e identificación de Enterococcus spp. procedentes de muestras clínicas. Métodos: se analizaron 150 muestras clínicas (orina, sangre, fecales, exudados vaginales, exudados de lesiones de piel y de catéteres) desde enero hasta abril de 2010, empleando el medio cromogénico y los medios convencionales correspondientes como controles, se evaluó la incidencia de Enterococcus spp. Se identificaron los aislamientos con un conjunto de 12 pruebas bioquímicas. A partir de los datos de la identificación bioquímica se determinaron los indicadores de calidad tanto para el medio CromoCen® ENT como para los medios de referencia. Resultados: el medio cromogénico promovió el crecimiento de Enterococcus spp. en solo 24 h, lo cual permitió su fácil reconocimiento por la coloración rosada de las colonias. Los indicadores de calidad diagnóstico mostraron valores superiores a 95 %. El mayor porcentaje de aislamientos se obtuvo en las muestras de orina. Enterococcus faecalis resultó la especie mayormente encontrada en el total de las muestras. Conclusiones: CromoCen® ENT permitió la correcta y rápida identificación de Enterococcus spp. procedentes de diversas muestras clínicas.

Introduction: the frequent incidence of Enterococci at hospitals and their growing antimicrobial resistance worldwide make the in-hospital surveillance and control a pressing need; consequently, it is indispensable to avail of more sensitive and accurate diagnostic means. Objective: to broaden the evaluation of functionality of CromoCen® ENT chromogenic medium for the isolation and identification of Enterococcus spp. from clinical samples. Methods: one hundred and fifty clinical samples were analyzed (urine, blood, feces, vaginal smears, skin lesion exudates and exudates from catheters) in the January-April period, 2010 by using the chromogenic medium and the corresponding conventional culture media as controls; the incidence of Enterococcus spp was evaluated. The isolations were identified with 12 biochemical tests. From the biochemical identification data, it was possible to determine the quality indicators for both CromoCen® ENT and the reference media. Results: the chromogenic medium encouraged the growth of Enterococcus species in 24 hours, allowing their easy recognition due to the pink coloration of the colonies. The diagnostic quality indicator values were over 95 %. The highest percentage of isolates was observed in the urine samples. Enterococcus faecalis was the mostly found species. Conclusions: CromoCen® ENT allowed quick and accurate identification of Enterococcus spp. from various clinical samples.

Aspectos fundamentales sobre el género Enterococcus como patógeno de elevada importancia en la actualidad / Fundamental features on he Enterococcus genus as a very important pathogen at present time

En los últimos años el género Enterococcus ha cobrado una gran importancia al nivel internacional por su elevada incidencia en las enfermedades nosocomiales y por la adquisición de resistencia a muchos antimicrobianos. De igual manera, son considerados indicadores de la inocuidad de los alimentos, pues debido a su amplia distribución, pueden encontrarse en estos productos y sobrevivir a los procesos de tratamiento a que son sometidos, por su elevada resistencia a condiciones adversas. Igualmente, se encuentran dentro del grupo de microorganismos indicadores de contaminación fecal de las aguas, y se consideran como el indicador más eficiente para evaluar la calidad del agua de mar para uso recreativo. Aunque en Cuba existen algunos reportes de aislamientos de estos microorganismos en la clínica, el diagnóstico en este sentido aún es insuficiente, también es escasa o nula la búsqueda de estos microorganismos en aguas y alimentos, por lo que resulta imprescindible realizar una revisión bibliográfica sobre esta temática. El objetivo de esta primera revisión consiste en profundizar en los aspectos fundamentales sobre el género Enterococcus.

In the last years Enterococcus genus has gained in relevance due to its high incidence in nosocomials illnesses and resistance acquisition to many antimicrobials agents. These microorganisms are considered indicators of the food inocuit due to their wide distribution, their presence in products and their ability to survive different processes and their high resistance to adverse conditions. Simillary, they are considered as indicators microorganisms of fecal contamination of water, being considered as the most efficient parameter to evaluate the quality of recreational seewater. Although in Cuba exist some reports about the isolations of these microorganisms in the clinic, the diagnosis is still insufficient. Also is poor or null the search of these microorganisms in waters and foods, therefore it is indispensable to carry out a review on this matter. The objective of this first revision consists on approaching the more fundamental aspects related with Enterococcus genus.

Caracterización de la peptona de soya para el cultivo de microorganismos / Characterization of soy peptone for the culture of microorganisms

Se caracterizó una peptona de soya, obtenida con enzima papaína como agente hidrolizante. La evaluación físico-química de la base nutritiva obtenida a escala piloto e industrial mostró las características físico-químicas siguientes: pérdida por desecación 1,93 por ciento, nitrógeno amínico 1,71 por ciento, nitrógeno total 8,63 por ciento, cloruros (como NaCl) 5,45 por ciento y pH 6,94. Para la evaluación funcional de los lotes piloto e industriales (3 lotes), se incorporó la peptona de soya desarrollada y una tomada como referencia, procedente de la firma Biotécnica Internacional (México) a una mezcla de bases La evaluación mostró que no existieron diferencias significativas (p<0,05) en los valores de absorbancia a 640 nm obtenidos en la promoción del crecimiento entre el producto desarrollado y el de referencia para Staphylococcus aureus ATCC 25923. Para Streptococcus pyogenes ATCC 19615, se observó una ligera superioridad (diferencia significativa para p<0,05), a partir de la quinta hora de incubación a favor de los lotes industriales en comparación con la peptona de soya de referencia. Se comprobó, que la promoción del crecimiento en los medios agar y caldo triptona soya y agar extracto de malta, para los microorganismos evaluados resultó similar o superior (diferencias significativas para p<0,05) en los elaborados con la peptona de soya experimental, en comparación con los formulados con la base de referencia

A soy peptone obtained with enzyme papain as a hydrolyzing agent was characterized. The physicochemical evaluation of the nutritive base attained at pilot and industrial scale showed the following characteristics: loss due to desiccation, 1.93 %; aminic nitrogen, 1.71 %; total nitrogen, 8.63 %; chlorides (as NaCl), 5.45 %; and pH, 6.94. For the functional evaluation of the pilot and industrial batches (3), developed soy peptone and another one taken as a reference from the Biotécnica Internacional firm (México), was incorporated to a mixture of bases. There were no significant differences (p <0.05) in the absorbance values at 640 nm obtained in the promotion of the growth between the developed product and that of reference for Staphylococcus aureus ATCC 25923. For Streptococcus pyogenes ATCC 19615, it was observed a mild superiority (significant difference for p < 0.05) starting from the 5th hour of incubation in favor of the industrial batches compared with the reference soy peptone. It was proved that the promotion of the growth in the soy triptone agar and broth media and in malt extract agar for the evaluated microorganisms was similar or higher (significant differences for p < 0.05) in those prepared with the experimental soy peptone, in comparison with the formulated with the reference base